細胞培養板使用過程中容易被忽視的“邊緣效應”

邊緣效應(Edge Effect)是指在利用96孔（或更多）培養板進行細胞培養時，處在周邊及四個角孔中的細胞通常會表現出異常的現象。

產生邊緣效應的原因

1. 溫度：聚苯乙烯本身為不良熱導體，將板從室溫（25℃左右）置于37℃的溫箱，隨著孔板升溫，在外周孔與中心孔之間可能存在熱力學梯度。

2. 蒸發：在培養箱經常開關的情況下，由于位置效應，邊緣孔的濕度較中間孔更低，水分揮發的現象就更為嚴重。容易造成四周培養基的體積會明顯少于中間孔，而四個角落則更甚。對于長時間周期的研究來說，這是一個不容忽視的問題——隨著培養基的蒸發，孔內的培養基成分和藥物濃度將增加，這可能導致孔內沉淀的出現。孔與孔之間的營養物濃度、pH值也會影響基因和蛋白質的表達，以及最終的細胞生長發生變化。隨之而來的Western、PCR/qPCR、ELISA和其他應用也就越不一致。

不推薦的應對辦法

1. 留空：許多研究人員會通過避免使用邊緣孔來提高數據可重復性，比如使用96孔板，外圍的36個孔將被棄用（板的37.5%被浪費）。因此，實驗組須分布在多塊培養板上以達到足夠的通量，增加了工作量和成本，同時也降低了實驗中培養板布局的靈活性。

2. 填充：PBS溶液、水或培養基填充外孔將有助于板的水合，限制蒸發，但這可能會成為細菌的滋生地。

3. 平鋪：當堆疊起來的時候，處于頂部和底部的孔板將比中間的更快達到37℃，造成溫度梯度。但大多數培養箱被不止一個研究人員使用且空間有限，如果其他人選擇堆放，仍然會阻礙空氣流向你的樣品，影響溫度。

防止邊緣效應的建議

1. 盡量縮短試驗周期，從而減少液體在孔中儲存的時間，減少蒸發。

2. 使用低蒸發蓋帶冷凝環的蓋子。

3. 使用透明或鋁箔密封膠帶進行生化測定，或使用透氣的無菌膠帶進行細胞測定。